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重组胶原蛋白的细胞迁移实验原理
时间:2024-07-12   浏览:523次
细胞迁移实验原理
 
细胞迁移(Cell migration):因其类似体外伤口愈合过程,又名伤口愈合实验(Wound healing assay),是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。可用于可以观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和相互作用的影响。重组胶原蛋白用于组织修复与承建时,应有利于细胞的识别、移行。如需要,可采用组织提取胶原蛋白国家标准品作为对照材料,对比分析重组胶原蛋白的细胞的识别、移行作用。
 
细胞迁移试验方法
细胞划痕法是测定细胞迁移运动的简洁方法,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至试验设定的时间(例如24h).观察周边细胞是否迁移至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力。试验通常需设定对照组和供试品组.对照组包括对照材料组和空白对照组,通过不同组之间的细胞向划痕区移行的比较,判断供试品组细胞的迁移能力。
 
细胞迁移实验步骤
1、先用marker笔在6孔板背后每孔横向和纵向各三等份划线做记号。按每孔约(5~15)X105个插种细胞。目标为培养24h后能达到95%~100%汇合状态。每组3个重复孔。
2、细胞培养24h后用10μL枪头比着直尺垂直对准孔板,向下轻推纵向划线形成划痕,用PBS漂洗细胞3次,去除划掉的细胞,分别在样品组和参照材料组加入2mL无血清培养基配制的供试品和对照材料,终浓度推荐为0.5mg/mL。空白对照组只加入无血清培养基。
3、在37 ℃,5% CO₂培养箱培养,于0h、24h后,以横向句和纵向划线的交点为核心,在40倍显微镜下拍照。
(注:本研究参考YY/T 1849.1-2022《重组胶原蛋白》,其他材料如需评价细胞增殖,迁移、分化和粘附,也可也可使用本方法进行相关研究。)
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